வைரஸ் நியூக்ளிக் அமிலம் கண்டறிதல்

பெரும்பாலான வைரஸ்களின் மரபணு வரிசைகள் அறியப்பட்டுள்ளன.நியூக்ளிக் அமில ஆய்வுகள் டிஎன்ஏவின் குறுகிய பகுதிகளாகும், இவை நிரப்பு வைரஸ் டிஎன்ஏ அல்லது ஆர்என்ஏ பிரிவுகளுடன் கலப்பினமாக்க வடிவமைக்கப்பட்டுள்ளன.பாலிமரேஸ் சங்கிலி எதிர்வினை (PCR) வைரஸ் கண்டறிதலுக்கு மிகவும் திறமையான நுட்பமாகும்.உயர் செயல்திறன் கண்டறியும் முறைகள் சமீபத்தில் உருவாக்கப்பட்டுள்ளன.

A. நியூக்ளிக் அமிலம் கலப்பு நுட்பம்

நியூக்ளிக் அமில கலப்பினமானது, முக்கியமாக சதர்ன் ப்ளாட்டிங் (தெற்கு) மற்றும் வடக்கு ப்ளாட்டிங் (வடக்கு) உட்பட, வைரஸ் கண்டறியும் துறையில் வேகமாக வளரும் புதிய நுட்பமாகும்.கலப்பின மதிப்பீட்டின் பகுத்தறிவு டிஎன்ஏவின் குறுகிய பகுதிகளைப் பயன்படுத்துவதாகும் ("ஆய்வு" என அழைக்கப்படுகிறது) நிரப்பு வைரஸ் டிஎன்ஏ அல்லது ஆர்என்ஏ பிரிவுகளுடன் கலப்பினப்படுத்த வடிவமைக்கப்பட்டுள்ளது.சூடாக்குதல் அல்லது அல்கலைன் சிகிச்சை மூலம், இரட்டை இழைகள் கொண்ட இலக்கு டிஎன்ஏ அல்லது ஆர்என்ஏ ஒற்றை இழைகளாக பிரிக்கப்பட்டு பின்னர் ஒரு திடமான ஆதரவில் அசையாது.அதன் பிறகு, ஆய்வு சேர்க்கப்பட்டு இலக்கு டிஎன்ஏ அல்லது ஆர்என்ஏவுடன் கலப்பு செய்யப்படுகிறது.ஆய்வுக்கு ஐசோடோப்பு அல்லது கதிரியக்கமற்ற நியூக்ளைடு என்று பெயரிடப்பட்டிருப்பதால், இலக்கு டிஎன்ஏ அல்லது ஆர்என்ஏவை ஆட்டோரேடியோகிராஃபி அல்லது பயோட்டின்-அவிடின் அமைப்பு மூலம் கண்டறிய முடியும்.பெரும்பாலான வைரஸ் மரபணுக்கள் குளோன் செய்யப்பட்டு வரிசைப்படுத்தப்பட்டிருப்பதால், அவை மாதிரியில் உள்ள ஆய்வுகளாக வைரஸ் சார்ந்த தொடர்களைப் பயன்படுத்தி கண்டறிய முடியும்.தற்போது, ​​கலப்பின முறைகளில் பின்வருவன அடங்கும்: டாட் ப்ளாட் , செல்களில் சிட்டு கலப்பினம், டிஎன்ஏ ப்ளாட்டிங்(டிஎன்ஏ) (சதர்ன் ப்ளாட்) மற்றும் ஆர்என்ஏ ப்ளாட்டிங்(ஆர்என்ஏ) (நார்தர்ன் ப்ளாட்).

பி.பி.சி.ஆர் தொழில்நுட்பம்

சமீபத்திய ஆண்டுகளில், உணர்திறன் இல்லாத அல்லது பயிரிட முடியாத வைரஸ்களைச் சோதிப்பதற்காக பிசிஆர் அடிப்படையிலான இன் விட்ரோ நியூக்ளிக் அமிலம் பெருக்க நுட்பங்களின் தொடர் உருவாக்கப்பட்டுள்ளது.PCR என்பது விட்ரோ பாலிமரேஸ் எதிர்வினை மூலம் குறிப்பிட்ட DNA வரிசையை ஒருங்கிணைக்கக்கூடிய ஒரு முறையாகும்.PCR இன் செயல்முறையானது மூன்று படிகளின் வெப்ப சுழற்சியை உள்ளடக்கியது: denaturation , annealing , and extension அதிக வெப்பநிலையில் (93℃~95℃), இரட்டை இழையுடைய DNA இரண்டு ஒற்றை DNA இழைகளாக பிரிக்கப்படுகிறது;பின்னர் குறைந்த வெப்பநிலையில் (37℃~60℃), இரண்டு ஒருங்கிணைந்த நியூக்ளியோடைடு ப்ரைமர்கள் நிரப்பு டிஎன்ஏ பிரிவுகளுக்கு இணைகின்றன;Taq நொதிக்கு (72℃) பொருத்தமான வெப்பநிலையில், புதிய டிஎன்ஏ சங்கிலிகளின் தொகுப்பு ப்ரைமர் 3' இறுதியில் இருந்து நிரப்பு டிஎன்ஏவை டெம்ப்ளேட்டுகளாகவும், ஒற்றை நியூக்ளியோடைட்களை பொருட்களாகவும் பயன்படுத்துகிறது.எனவே ஒவ்வொரு சுழற்சிக்குப் பிறகும், ஒரு டிஎன்ஏ சங்கிலியை இரண்டு சங்கிலிகளாகப் பெருக்கலாம்.இந்த செயல்முறையை மீண்டும் செய்வதன் மூலம், ஒரு சுழற்சியில் ஒருங்கிணைக்கப்பட்ட ஒவ்வொரு டிஎன்ஏ சங்கிலியும் அடுத்த சுழற்சியில் டெம்ப்ளேட்டாக பயன்படுத்தப்படலாம், மேலும் ஒவ்வொரு சுழற்சியிலும் டிஎன்ஏ சங்கிலிகளின் எண்ணிக்கை இரட்டிப்பாகும், அதாவது பிசிஆர் உற்பத்தி 2n பதிவு வேகத்தில் பெருக்கப்படுகிறது.25 முதல் 30 சுழற்சிகளுக்குப் பிறகு, பிசிஆர் உற்பத்தி எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் மூலம் அடையாளம் காணப்படுகிறது, மேலும் குறிப்பிட்ட டிஎன்ஏ தயாரிப்புகளை புற ஊதா ஒளியின் கீழ் (254nm) காணலாம்.அதன் தனித்தன்மை, உணர்திறன் மற்றும் வசதிக்காக, PCR ஆனது HCV, HIV, CMV மற்றும் HPV போன்ற பல வைரஸ் தொற்றுகளின் மருத்துவ நோயறிதலில் ஏற்றுக்கொள்ளப்பட்டது.PCR மிகவும் உணர்திறன் உடையது, இது fg மட்டத்தில் வைரஸ் டிஎன்ஏவைக் கண்டறிய முடியும், தவறான நேர்மறையைத் தவிர்க்க அறுவை சிகிச்சை மிகவும் கவனமாக மேற்கொள்ளப்பட வேண்டும்.கூடுதலாக, நியூக்ளிக் அமில சோதனையின் நேர்மறையான முடிவு மாதிரியில் நேரடி தொற்று வைரஸ் இருப்பதாக அர்த்தமல்ல.

PCR நுட்பத்தின் பரந்த பயன்பாட்டுடன், பல்வேறு சோதனை நோக்கங்களுக்காக PCR நுட்பத்தின் அடிப்படையில் புதிய நுட்பங்கள் மற்றும் முறைகள் உருவாக்கப்படுகின்றன.உதாரணமாக, நிகழ்நேர அளவு PCR வைரஸ் சுமையை கண்டறிய முடியும்;திசு அல்லது உயிரணுக்களில் வைரஸ் தொற்றை அடையாளம் காண PCR இன் சிட்டு பயன்படுத்தப்படுகிறது;உள்ளமைக்கப்பட்ட PCR ஆனது PCR இன் தனித்துவத்தை அதிகரிக்கலாம்.அவற்றில், நிகழ்நேர அளவு PCR மிகவும் வேகமாக உருவாக்கப்பட்டுள்ளது.TaqMan ஹைட்ரலிசிஸ் ஆய்வு, கலப்பின ஆய்வு மற்றும் மூலக்கூறு பீக்கான் ஆய்வு போன்ற பல புதிய நுட்பங்கள் நிகழ்நேர அளவு PCR நுட்பமாக இணைக்கப்பட்டுள்ளன, இது மருத்துவ ஆராய்ச்சியில் பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது.நோயாளிகளின் உடல் திரவத்தில் வைரஸ் சுமையை துல்லியமாக கண்டறிவதைத் தவிர, மருந்து-சகிப்புத்தன்மை கொண்ட விகாரிகளைக் கண்டறியவும் இந்த முறை பயன்படுத்தப்படலாம்.எனவே, நிகழ்நேர அளவு PCR முக்கியமாக குணப்படுத்தும் விளைவு மதிப்பீடு மற்றும் மருந்து சகிப்புத்தன்மை கண்காணிப்பில் பயன்படுத்தப்படுகிறது.

C. வைரஸ் நியூக்ளிக் அமிலங்களின் உயர்-செயல்திறன் கண்டறிதல்

புதிதாகத் தோன்றும் தொற்று நோய்களை விரைவாகக் கண்டறிவதற்கான தேவைகளைப் பூர்த்தி செய்ய, DNA சில்லுகள் (டிஎன்ஏ) போன்ற பல்வேறு உயர்-செயல்திறன் கண்டறிதல் முறைகள் நிறுவப்பட்டுள்ளன.டிஎன்ஏ சில்லுகளுக்கு, குறிப்பிட்ட ஆய்வுகள் ஒருங்கிணைக்கப்பட்டு, சிறிய சிலிக்கான் சில்லுகளுடன் மிக அதிக அடர்த்தியில் இணைக்கப்பட்டு, டிஎன்ஏ ஆய்வு மைக்ரோஅரேயை (டிஎன்ஏ) உருவாக்குகின்றன, அவை மாதிரியுடன் கலப்பினப்படுத்தப்படுகின்றன.கலப்பினத்தின் சமிக்ஞையை கன்ஃபோகல் மைக்ரோஸ்கோப் அல்லது லேசர் ஸ்கேனர் மூலம் படமாக்கலாம் மற்றும் கணினி மூலம் மேலும் செயலாக்கப்பட்டு பல்வேறு மரபணுக்கள் தொடர்பான பெரிய தரவுத் தொகுப்பைப் பெறலாம்.இரண்டு வகையான டிஎன்ஏ சிப்கள் உள்ளன."தொகுப்பு சிப்" பின்வருமாறு: குறிப்பிட்ட ஒலிகோநியூக்ளியோடைடுகள் நேரடியாக சில்லுகளில் ஒருங்கிணைக்கப்படுகின்றன.மற்றொன்று டிஎன்ஏ பூல் சிப்.குளோன் செய்யப்பட்ட மரபணுக்கள் அல்லது PCR தயாரிப்புகள் ஸ்லைடில் ஒழுங்காக அச்சிடப்படுகின்றன.டிஎன்ஏ சிப் தொழில்நுட்பத்தின் நன்மை என்னவென்றால், ஒரே நேரத்தில் ஒரு பெரிய அளவிலான டிஎன்ஏ வரிசைகளைக் கண்டறிவது.நோய்க்கிருமி கண்டறிதல் சிப்பின் சமீபத்திய பதிப்பு 1700 மனித வைரஸ்களை ஒரே நேரத்தில் அடையாளம் காண முடியும்.டிஎன்ஏ சிப் தொழில்நுட்பம் பாரம்பரிய நியூக்ளிக் அமில கலப்பின முறைகளின் சிக்கல்களைத் தீர்த்தது மற்றும் வைரஸ் நோயறிதல் மற்றும் தொற்றுநோயியல் ஆய்வில் மிகவும் பரந்த பயன்பாடுகளைக் கொண்டுள்ளது.